細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是一種快速簡(jiǎn)便的自動(dòng)化細(xì)胞數(shù)量和活率測(cè)量裝置，目前主要通過(guò)基于顯微圖像的圖像識(shí)別法和基于阻抗的電阻抗計(jì)數(shù)法。

基于顯微圖像的圖像識(shí)別法，通常通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色或AO/PI等熒光染料染色，整合先進(jìn)的光學(xué)成像技術(shù)和智能圖像識(shí)別技術(shù)，進(jìn)行自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)。臺(tái)盼藍(lán)是細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性，以檢測(cè)細(xì)胞是否存活?；罴?xì)胞的細(xì)胞膜完整，能排斥臺(tái)盼藍(lán)，不會(huì)被染成藍(lán)色；而死細(xì)胞由于細(xì)胞膜破損或不完整，會(huì)被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色，因此可借助臺(tái)盼藍(lán)染色進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，區(qū)分死活細(xì)胞。吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）是可以與細(xì)胞核內(nèi)雙鏈DNA結(jié)合的熒光染料。

AO可以自由穿透細(xì)胞膜，嵌入所有細(xì)胞（活細(xì)胞和死細(xì)胞）的細(xì)胞核中發(fā)出綠色熒光；PI只能通過(guò)破損的細(xì)胞膜，即死細(xì)胞的細(xì)胞膜，嵌入死細(xì)胞的細(xì)胞核中發(fā)出紅色熒光。當(dāng)兩種染料同時(shí)存在于死細(xì)胞核中時(shí)，會(huì)發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致死細(xì)胞發(fā)出紅色熒光。因此可通過(guò)AO/PI準(zhǔn)確區(qū)分死活細(xì)胞，進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞計(jì)數(shù)。

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)量校準(zhǔn)以下校準(zhǔn)項(xiàng)目應(yīng)在細(xì)胞計(jì)數(shù)儀經(jīng)過(guò)開(kāi)機(jī)預(yù)熱、儀器達(dá)到正常工作條件后進(jìn)行，校準(zhǔn)前應(yīng)當(dāng)確保儀器工作狀態(tài)正常，參照附錄 A 進(jìn)行校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)記錄。

1 外觀(guān)要求用目視并配合手動(dòng)操作進(jìn)行檢查。儀器外表應(yīng)光滑平整，不應(yīng)有影響工作性能的機(jī)械損傷；顯示屏表面應(yīng)平整潔凈無(wú)劃痕，讀數(shù)清晰；開(kāi)關(guān)及按鍵功能良好。儀器應(yīng)有以下標(biāo)識(shí)：名稱(chēng)、型號(hào)、編號(hào)、生產(chǎn)廠(chǎng)家、出廠(chǎng)日期。

2 測(cè)試前準(zhǔn)備開(kāi)啟儀器，參照儀器使用說(shuō)明書(shū)，使儀器達(dá)到最佳工作條件。根據(jù)客戶(hù)使用要求、被校準(zhǔn)儀器的日常工作模式和選取的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)類(lèi)型選取合適的細(xì)胞測(cè)量模式。

3 空白值 JJF xxxx-xxxx 7取空白稀釋液、純水或蒸餾水進(jìn)行上樣計(jì)數(shù)，測(cè)量 4 次，記錄測(cè)量值并取其中的最高值作為空白值。

4 示值誤差儀器的示值誤差以細(xì)胞濃度（總細(xì)胞濃度、活細(xì)胞濃度和死細(xì)胞濃度）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、細(xì)胞活率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、顆粒直徑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)量值與標(biāo)準(zhǔn)值的誤差表示。根據(jù)被校準(zhǔn)儀器的日常工作模式選取合適濃度、比例和顆粒直徑的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)前上下顛倒 30-50 次左右從而保證充分混勻（瓶底無(wú)沉積物）。用移液器從充分混勻的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣本液體中間層吸取液體進(jìn)行上樣計(jì)數(shù)，測(cè)量 5 次，記錄測(cè)量值，并按照公式（1）進(jìn)行示值誤差計(jì)算。CiCs（1）式中：—細(xì)胞計(jì)數(shù)器示值誤差，/mL、%或 μm； Ci—5 次測(cè)量值的平值，/mL、%或 μmCs—標(biāo)準(zhǔn)值，/mL、%或 μm。

5 測(cè)量重復(fù)性?xún)x器重復(fù)性以細(xì)胞濃度（總細(xì)胞濃度、活細(xì)胞濃度和死細(xì)胞濃度）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、細(xì)胞活率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、顆粒直徑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 10 次測(cè)量值的實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。根據(jù)被校準(zhǔn)儀器的日常工作模式選取合適濃度、比例和顆粒直徑的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)前上下顛倒 30-50 次左右從而保證充分混勻（瓶底無(wú)沉積物）。用移液器從充分混勻的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣本液體中間層吸取液體進(jìn)行上樣計(jì)數(shù)，測(cè)量 10 次，記錄測(cè)量值，并按照公式

（1）進(jìn)行示值誤差計(jì)算。1( )21nC CSTDnii i

（2）式中：STD-測(cè)量值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，/mL、%或 μm； n—測(cè)量次數(shù)； JJF xxxx-xxxx 8 Ci —第 i 次測(cè)量值，/mL、%或 μm； Ci —測(cè)量平均值，/mL、%或 μm。8 校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)經(jīng)校準(zhǔn)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀應(yīng)填發(fā)校準(zhǔn)證書(shū)，校準(zhǔn)證書(shū)應(yīng)符合 JJF1071-2010 中5.12 的要求，參照附錄 C 給出校準(zhǔn)項(xiàng)目名稱(chēng)、測(cè)量值以及擴(kuò)展不確定度。9 復(fù)校時(shí)間間隔送校單位可根據(jù)實(shí)際情況自主決定細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的復(fù)校時(shí)間間隔，建議不超過(guò)1 年。

公司背景介紹：

澤恒.華譜在計(jì)量校準(zhǔn)、驗(yàn)證與確認(rèn)的優(yōu)勢(shì)是專(zhuān)注做生物制藥質(zhì)控服務(wù)，針對(duì)一些特殊的儀器都非常熟悉，核心團(tuán)隊(duì)來(lái)源于制藥公司和儀器廠(chǎng)家，對(duì)儀器和GMP法規(guī)都很熟悉，比如：我們團(tuán)隊(duì)專(zhuān)門(mén)研發(fā)了替代進(jìn)口的熒光定量PCR儀校準(zhǔn)裝置，大大降低熒光定量/定性PCR儀校準(zhǔn)的成本（遠(yuǎn)低于同行）；我們開(kāi)發(fā)了細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的校準(zhǔn)內(nèi)部規(guī)程；開(kāi)發(fā)了細(xì)胞復(fù)蘇儀的內(nèi)部校準(zhǔn)規(guī)程；開(kāi)發(fā)了凝膠電泳掃描儀的校準(zhǔn)規(guī)程；我們開(kāi)發(fā)了溫度驗(yàn)證所需要的超低溫和超高溫一體化無(wú)線(xiàn)探頭，降低用戶(hù)大量使用探頭時(shí)的成本，代替了進(jìn)口；這些例子還有很多，因?yàn)槲覀兌际巧锍錾恚晕覀冴P(guān)注每一個(gè)生物用戶(hù)工藝要求，在生物制藥儀器設(shè)備上面專(zhuān)注，“與質(zhì)量同行、做儀器設(shè)備質(zhì)控"，為了讓生物制藥更安全而努力。

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